利用HPLC法測定人唾液中卡馬西平濃度，并觀察其藥代動力學特征. 方法摘要： 采用Shimpack CLCODS C18色譜分析柱 （150 mm×6 mm, 5 μm），以甲醇水（53∶47）為流動相，流速為1.0 mL%26#12539;min-1,檢測波長為212 nm,柱溫為室溫,進樣量50 μL. 根據唾液藥物濃度求算6名健康受試者單劑量口服卡馬西平片劑的藥代動力學參數. 結果摘要： 本測定方法線形范圍為0.40~4.32 mg%26#12539;L-1，相關系數r=0.999，zui低檢出濃度為30 μg%26#12539;L-1 （按S/N≥3計），方法平均回收率為99.17%-104.80%；日內RSD、日間RSD分別在2.6%-4.9%和3.0%-8.6%. 藥動學參數表明，卡馬西平人體內過程符合單室開放模型，Tmax, Cmax, ke, T1/2, AUC（0~inf） 分別為（4.50±3.15）h, （1.52±0.22） mg%26#12539;L-1, （0.0090±0.0006） h-1, （77.16±5.26） h, （132.18±8.82） mg%26#12539;h%26#12539;L-1. 單次給藥后，CBZ唾液濃度時間曲線出現多峰現象. 結論摘要： 該法簡便、快速、專一性強，適用于卡馬西平唾液藥物濃度測定及藥代動力學探究之用.
　　【 色譜法，高壓液相；卡馬西平；唾液；藥代動力學
　　0引言
　　卡馬西平（carbamazepine， CBZ）是臨床上常用的抗癲癇藥. 由于此藥的藥代動力學個體差異大，吸收不規則，血藥濃度治療窗窄（4~12 mg%26#12539;L-1）,輕易引起毒副反應［1］. 為保證藥品質量及臨床療效，把好臨床合理用藥關［2-4］，有必要對其進行血藥濃度監測和個體化用藥. 但血樣采集常增加患者痛苦，且操作較繁瑣［5］，尤其對于嬰幼兒更為不便. 而唾液取樣具有無創傷、經濟簡便、易于接受等優點. 為探索用無創傷性生物制品取代血樣的新途徑，通過監測唾液中藥物濃度,實現個體化用藥,并在社區、家庭推廣，取代傳統的患者到門診抽取血樣的不方便模式，我們利用HPLC法測定卡馬西平唾液濃度，并通過藥代動力學探究，考察其適用性［6］.

　　1材料和方法
　　1.1材料① 對象健康受試者6（男3，女3）名，年齡20~25歲，平均（22.2±1.8）歲；體質量42~65 kg，平均（53.7±8.9） kg. 肝腎功能正常，受試前1 wk及受試期間未接受其他藥物. 每位受試者均自愿參加實驗，具體了解實驗過程并簽署知情同意書. ② 儀器LC10AVP液相色譜系統（Shimadzu，Japan）摘要：含兩臺LC10ATvp型泵，7725型進樣閥（配100 μL定量環），CTO10Asvp柱箱，Classvp 5.032色譜工作站（Shimadzu，Japan），Shimpack CLCODS C18不銹鋼分析色譜柱（150 mm×6 mm，5 μm），3D紫外檢測器；渦旋混合器（XW80型，上海*醫學院儀器廠）；高速離心機（ABBOTT，USA）. ③ 藥品和試劑卡馬西平片摘要：上海復旦復華藥業有限公司生產，批號20030123卡馬西平標準品摘要：中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜級,其他試劑均為分析純.

　　1.2色譜條件色譜柱摘要：Shimpack CLCODS C18柱（150 mm×6 mm，5 μm）；流動相摘要：甲醇水（53∶47）；流速1 mL%26#12539;min-1；檢測波長212 nm；柱溫為室溫；進樣量100 μL.
　　1.3方法
　　1.3.1CBZ標準液的制備精密稱取4.0 mg的CBZ標準品，置于50 mL量瓶中，用甲醇定容，即得濃度為0.08 g%26#12539;L-1的CBZ標準液.
　　1.3.2標準曲線制備取正常人混合空白唾液1 mL 5份，分別加入CBZ標準液5，12，24，38和54 μL，配成濃度分別為0.40，0.96，1.92，3.04和4.32 mg%26#12539;L-1的系列標準樣品. 取待測樣品150 μL，加入蛋白沉淀劑150 μL，振蕩混勻后高速離心5 min（4500 g）,取上清液100 μL進樣. 以峰面積為縱坐標（A），CBZ濃度為橫坐標（C），進行線形回歸，得回歸方程摘要：C=0.000003247A-0.1738（r=0.999， n=6），唾液中CBZ濃度在0.4~4.3 mg%26#12539;L-1范圍內線形關系良好. CBZ的zui低檢測濃度為30 μg%26#12539;L-1（S/N≥3）.
　　1.3.3方法專屬性將空白唾液、CBZ標準溶液及供試樣品分別進樣，其三維圖譜分別見Fig 1. 在本色譜條件下，CBZ的保留時間為7.2 min，唾液中蛋白質等干擾物質和CBZ可達基線*分離，確保分析方法的專一性.
　　1.3.4方法回收率和精密度按“標準曲線制備”項下操作，對已知含CBZ 0.40，1.92，4.32 mg %26#12539;L-1低、中、高3種濃度的唾液供試品，于同日內連續測定5次，計算其日內精密度；對上述3種濃度樣品于5 d內分別進行測定，計算日間精密度；同時計算方法回收率（Tab 1）.
　　1.3.5實驗設計6名受試者實驗前禁食12 h，于次日晨起空腹采集唾液2 mL（空白對照），隨即口服CBZ片劑200 mg；并于服藥后1.5, 3, 4.5, 6, 7.5, 9, 10.5, 12, 24, 72, 144和216 h收集唾液2 mL，按“標準曲線制備”項下方法測定唾液中CBZ濃度.

　　表1HPLC法測定唾液中卡馬西平的方法回收率和精密度　（略）
　　圖1卡馬西平色譜圖　（略）
　　2結果
　　經計算，6名健康受試者口服200 mg CBZ后的平均藥時曲線見Fig 2. 消除速率常數ke用消除相中對數藥物濃度時間回歸曲線的斜率求得，以梯形法求算AUC, Tmax, Cmax均采用實測值. 其主要藥動學參數Tmax, Cmax, ke, T1/2, AUC（0~inf）分別為（4.50±3.15）h, （1.52±0.22） mg%26#12539;L-1, （0.0090±0.0006） h-1, （77.16±5.26） h, （132.18±8.82） mg %26#12539;h%26#12539;L-1.
　　圖2健康受試者口服200 mg卡馬西平后的平均藥時曲線　（略）
　　3討論

　　以HPLC法測定血液中CBZ的方法已有報道，其樣品預處理方法主要為液液萃取法［7-11］. 我們采用蛋白沉淀法，較萃取法回收率高，操作簡便快速、價廉，而且避免了有機試劑揮發給操作者帶來的健康損害. 本實驗建立的HPLC法測定唾液中的CBZ濃度，樣品處理方便，出峰快,10 min即可完成1個樣品分析，分析成本低. CBZ和樣品中的蛋白質等雜質分離*，具有較高的專一性. 以峰面積和唾液中藥物濃度之間的線形關系做定量標準，相關性好. 回收率及精密度試驗結果表明，本法回收*，重現性良好，是一種靈敏、專一、快速、簡便的測定方法.

　　6名健康受試者單劑量口服CBZ片劑200 mg的唾液藥濃度經時變化趨向基本相似，但達峰時間具有較大的個體差異（4.50±3.15） h，和文獻報道的結果基本一致［12］，再次證實了對CBZ進行治療藥物監測,實行個體化用藥的必要性. CBZ服藥后吸收較為迅速，T1/2較長,其人體內的藥時曲線符合一級吸收的單室模型. 另外，本次試驗發現CBZ藥時曲線存在多峰現象，6名受試者中，4人出現三峰，2人出現雙峰，CBZ多峰現象可能和其胃腸道吸收的非齊性 （Unhomogeneous） 和腸肝循環 （Enterhepatic Circulation，EHC）有關［12，13］. 本次試驗只是單劑量給藥,對CBZ片的多峰現象觀察還須在多次給藥達到穩態時的狀態下繼續進行觀察. 對多峰現象的探究，可為臨床制訂更平安、有效、合理的給藥方案提供依據，減少不良反應的發生.
　　我們建立了簡便、快速檢測唾液中CBZ的方法，適用性良好，為以唾液進行CBZ治療藥物監測提供了依據，也為進一步進行多中心臨床試驗，考察CBZ唾液濃度和CBZ臨床療效及不良反應發生率間的關系奠定了基礎.